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精密カット肺スライス (PCLS) リソース ハブ

私たちの包括的な 精密切断肺スライス(PCLS)リソースハブは PCLS アプリケーションに特化したツール、データ、文献の強力なコレクションを提供することで、研究者をサポートするように設計されています。肺生物学を調査している場合でも、潜在的な治療法を評価している場合でも、詳細な方法論を探している場合でも、当社のリソース ハブは研究ニーズを満たすようにカスタマイズされています。ここでは、PCLS に焦点を当てた厳選されたイベント、プロトコル、出版物、physioLens PCLS プラットフォームに関する洞察を見つけることができます。

ブログ

フィジオレンズ

自動気道収縮性、用量反応、繊毛運動およびカルシウムイメージング研究

 その フィジオレンズ 科学的プラットフォームです は、大阪で 正確な 再現可能な方法での生理学的および画像ベースの結果。 これには、自動化された顕微鏡と流体処理システムが含まれています。

physioLens の特徴:

  • オートメーション: フィジオレンズは、6 ウェル プレートのスライスの任意の場所で画像をキャプチャし、ユーザーの介入なしに線量を適用することができます。 画像はリアルタイムで分析され、気管支収縮データが提供されます。 
  • 投薬: アゴニストは、95 秒未満で 20% の培地交換を提供できる投与ノズルによって、ユーザーの介入なしでスライスに提供されます。 さらに、詳細な用量応答を自動的に完了するために、XNUMX つの投薬ボトルが提供されます。
  • 画像解析: 気道の画像は自動的に処理されて内腔の輪郭を捉え、気管支収縮を計算します。 
  • スライススキャン: 完全なスライス マッピングを備えた気道構成ウィザードを使用すれば、スライスをナビゲートする必要はありません。 クリック アンド ドラッグの XY ナビゲーションで目的の位置を微調整します。
フィジオレンズ

エキスポキューブ

精密PCLSのエアロゾル、治療薬、タバコ、電子タバコの煙への曝露

expoCube は、新しい Air Liquid Interface (ALI)/Transwell です。 試験管内/生体外 細胞や組織にエアロゾルを効率的に沈着させる曝露システム。温度勾配を介して粒子を標的組織に導くサーモフォレシスを使用することで、エクスポキューブは沈着率を2%から40%近くにまで高めます。 水晶 マイクロバランス(QCM) 蓄積された線量をリアルタイムで測定し、実験条件を正確に制御できます。

SCIREQと組み合わせると インエクスポーズ® 吸入暴露プラットフォームであるexpoCubeは、研究者が インビトロ、エクスビボ (NAIST) と インビボの モデルでは、3R の原則 (動物実験の置き換え、削減、改善) を遵守しながら化合物の使用を最適化します。

出版物

プロトコル

PCLS は初めてですか? ここに紹介があります!

1. 背景と意義

精密切断肺スライス(PCLS)は、貴重な 生体外で 肺の本来の組織構造、細胞構成、微小環境を保持する能力があるため、肺の生物学と疾患を研究するためのモデルとして最適です。PCLSは、 ビトロ 細胞培養と インビボの モデルは、肺組織の複雑さを維持しながら、制御された実験条件のためのプラットフォームを提供します。このモデルは、呼吸器疾患、薬理学、毒物学、感染症のダイナミクスの研究、および炎症、免疫反応、組織リモデリングなどの生理学的プロセスの調査に特に有用であることが証明されています。

研究ツールとしての PCLS の重要性は、動物実験の代替手段を開発する必要性が高まっていることからもさらに強調されています。科学研究​​における動物の使用の削減、改良、代替 (3R) の要求は、同じ肺サンプルを繰り返し研究できるため、動物の使用を効果的に最小限に抑えることができる PCLS を通じてますます満たされています。さらに、PCLS はヒト由来の組織を直接実験できるため、ヒトの肺の生理学に関する洞察を提供し、トランスレーショナル研究や個別研究の強力なツールとなっています。

2. PCLSの原則

PCLSの原理は、管理された実験室環境で一定期間生存性と機能性を維持する薄く均一な肺組織の切片を得ることです。肺組織内の複雑な細胞構造と自然な相互作用を保存することにより、PCLSは研究者が細胞反応、構造変化、組織特異的反応を実際の実験に非常によく似た方法で研究することを可能にします。 インビボの 条件。

これを達成するには、まず肺組織をその完全性を維持する方法で準備します。肺胞構造が完全に拡張されるように、肺は通常膨らまされます。これは、肺の自然な状態を正確に再現するために重要です。次に、組織は培地(多くの場合アガロース)に埋め込まれ、スライス中に形状と構造を維持するための構造的サポートを提供します。振動ミクロトームなどの精密切断器具を使用して、通常 100 ~ 500 ミクロンの厚さの薄いスライスを取得します。スライスの厚さが均一であるため、細胞が培地または試験化合物に一貫してさらされるようになり、実験全体で再現性が得られます。

3. PCLSの準備

PCLS の準備には、スライスが生存可能であり、構造的に無傷であり、機能的に天然の肺を代表していることを確認するためのいくつかの重要な手順が含まれます。

  • 収穫: 動物由来の PCLS の場合、肺は通常、無菌状態で安楽死させた動物 (通常はげっ歯類) から採取されます。ヒトの PCLS は、同意を得た外科的生検、組織片、または死後標本から採取できます。
  • インフレーション: 切除後、肺は生理食塩水または培養液で膨らまされますが、多くの場合、低融点アガロースなどの支持物質が混ぜられます。膨らませることで肺胞腔と気管支構造が安定し、スライスが肺の機能状態を反映するようになります。
  • 埋め込み: 膨らませた肺組織は、スライス中に組織をさらに安定させるためにアガロース マトリックスに埋め込まれます。肺アガロース ブロックは冷却されてマトリックスが固まり、半剛性構造が形成されます。
  • セクション: 振動ミクロトームや組織スライサーなどの精密切断器具は、埋め込まれた肺組織から薄く均一なスライスを切り出すために使用されます。スライスの厚さは、組織の生存率、酸素と栄養素の拡散、試験物質への曝露に影響を与えるため、慎重に制御されます。
  • 培地: スライス後、PCLS は栄養分を供給し肺の環境を模倣した培地で培養されます。一般的な培養培地には必須栄養素、抗生物質、および必要に応じて組織の生存能力を維持するための特定の成長因子またはシグナル伝達分子が補充されます。
  • 酸素供給と温度制御: 肺組織は低酸素状態や温度変動に敏感なので、適切な酸素供給と温度管理が重要です。一般的な培養条件は、スライスを 37°C、5% CO₂ に設定したインキュベーター内で維持することです。
  • 生存能力テスト: 肺切片の代謝活動と完全性は、多くの場合、MTT アッセイや LDH アッセイなどのアッセイを使用して評価されます。これらのテストでは、それぞれミトコンドリアの活動と膜の完全性を評価し、切片内の細胞の生存能力を示します。
  • 機能アッセイ: サイトカイン産生、収縮力測定、免疫細胞反応の画像化などの機能アッセイを使用して、PCLS が培養期間中に期待される生理学的反応を維持することを確認します。

 

始めるにあたって、最近の優れたレビュー記事を 2 つご紹介します。

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